Proteina obbligatoria su misura di Mannma del corredo di ELISA del ratto con 2 ore di tempo di analisi

Corredo obbligatorio su misura di ELISA del Lectin MBP MBL del mannano obbligatorio della proteina di Mannma del ratto

Ra di Cat.No E0629

Gamma standard della curva: 0.5ng/ml - 100ng/ml

Sensibilità: 0.25ng/ml

Dimensione: 96 pozzi

Stoccaggio: Immagazzini i reagenti a 2-8°C. per stoccaggio di 6 mesi eccessivo si riferiscono alla data di scadenza lo tengono ai cicli di disgelo ripetuti Avoid di -20°C. Se i diversi reagenti sono aperti è raccomandato che il corredo sia usato entro 1 mese.

il prodotto di *This serve per uso della ricerca soltanto, non nelle procedure di diagnosi. È altamente raccomanda di leggere questa istruzione interamente prima dell'uso.

Principio di analisi

Questo corredo è un'analisi Enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA). Il piatto è stato ricoperto prima con l'anticorpo del ratto MBP/MBL. MBP/MBL presentano nel campione si aggiungono e legano agli anticorpi ricoperti sui pozzi. E l'anticorpo allora biotinylated del ratto MBP/MBL si aggiunge e lega a MBP/MBL nel campione. Poi Streptavidin-HRP si aggiunge e lega all'anticorpo di Biotinylated MBP/MBL. Dopo incubazione Streptavidin-HRP sciolto è lavato via durante il punto di lavaggio. La soluzione del substrato poi si aggiunge ed il colore si sviluppa proporzionalmente alla quantità di ratto MBP/MBL. La reazione è terminata tramite l'aggiunta di acido ferma la soluzione e la capacità di assorbimento è misurata a 450 nanometro.

Uso progettato

Questo corredo del panino è per la rilevazione quantitativa accurata della proteina obbligatoria di Mannma del ratto, Lectin obbligatorio del mannano (anche conosciuto come MBP/MBL) in siero, il plasma, i galleggianti della coltura cellulare, i lysates delle cellule, omogeneati del tessuto.

Precauzioni

• Prima di uso, il corredo ed il campione dovrebbero essere riscaldati naturalmente alla temperatura ambiente 30 minuti.
• Questa istruzione deve essere seguita rigorosamente nell'esperimento.
• Una volta che il numero desiderato delle strisce è stato rimosso, immediatamente risigilli la borsa per proteggere il rimanere da deterioramento. Copra tutti i reagenti quando non in uso.
• Make sure che pipetta ordine e tasso di aggiunta da ben-a-bene quando pipettano i reagenti.
• La pipetta fornisce di punta ed il sigillatore del piatto a disposizione dovrebbe essere pulito ed eliminabile evitare la contaminazione trasversale.
• Eviti usando i reagenti dai lotti differenti insieme.
• La soluzione B del substrato è sensibile a luce, non espone la soluzione B del substrato per accendersi a lungo.
• Fermi la soluzione contiene l'acido. Usi prego la protezione dell'occhio, della mano e della pelle quando usando questo materiale. Eviti il contatto di pelle o delle mucose con il reagente del corredo.
• Il corredo non dovrebbe essere usato oltre la data di scadenza.

Reagente fornito

Preparato del reagente

Tutti i reagenti dovrebbero essere portati alla temperatura ambiente prima dell'uso.

La norma ricostituisce il 120μl della norma (128ng/ml) con 120μl di diluente standard per generare una soluzione di azione ordinaria 64ng/ml. Permetta che la norma si sieda per 15 minuti con agitazione delicata prima della fabbricazione delle diluizioni. Prepari i punti standard duplicati in serie diluendo il 1:2 della soluzione di azione ordinaria (64ng/ml) con il diluente standard per produrre le soluzioni 32ng/ml, 16ng/ml, 8ng/ml e 4ng/ml. Il diluente standard serve da norma zero (0 ng/ml). Tutta la soluzione restante dovrebbe essere congelata a -20°C ed essere usata entro un mese. La diluizione delle soluzioni tipo suggerite è come segue:

Amplificatore 20ml diluito del lavaggio del concentrato 30x dell'amplificatore del lavaggio nel deionizzato in o acqua distillata per rendere 500 ml di amplificatore del lavaggio 1x. Se i cristalli si sono formati nel concentrato, miscela delicatamente finché i cristalli completamente non si siano dissolti.

Procedura di analisi

1. Prepari tutti i reagenti, soluzioni tipo e campioni come istruiti. Porti tutti i reagenti alla temperatura ambiente prima dell'uso. L'analisi è eseguita alla temperatura ambiente.

2. Determini il numero delle strisce richieste per l'analisi. Inserisca le strisce nei telai per uso. Le strisce inutilizzate dovrebbero essere immagazzinate a 2-8°C.

3. Aggiunga bene la norma 50μl alla norma. Nota: Non aggiunga bene l'anticorpo alla norma perché la soluzione tipo contiene l'anticorpo biotinylated.

4. Aggiunga il campione 40μl ai pozzi del campione e poi aggiunga l'anticorpo di 10μl anti-MBP/MBL ai pozzi del campione, quindi aggiunga lo streptavidin-HRP 50μl ai pozzi del campione ed ai pozzi standard (pozzo di controllo non in bianco). Mescoli bene. Copra il piatto di sigillatore. Incubi 60 minuti a 37°C.

5. Rimuova il sigillatore e lavi il piatto 5 volte con l'amplificatore del lavaggio. Inzuppari i pozzi almeno nell'amplificatore del lavaggio da 0,35 ml per 30 secondi - 1 minuto per ogni lavaggio. Per il lavaggio automatizzato, aspiri tutti i pozzi e lavi 5 volte con l'amplificatore del lavaggio, riempiente troppo scaturisce con l'amplificatore del lavaggio. Macchi il piatto sugli asciugamani di carta o sull'altro materiale assorbente.

6. Aggiunga la soluzione A del substrato 50μl a ciascuno pozzo e poi aggiunga la soluzione B del substrato 50μl a ciascuno bene. Incubi il piatto coperto di nuovo sigillatore per 10 minuti a 37°C nello scuro.

7. Aggiunga 50μl fermano la soluzione a ciascuno bene, il colore blu si trasformerà il giallo immediatamente.

8. Determini la densità ottica (valore del OD) di ciascuno pozzo immediatamente facendo uso di un insieme del lettore del microplate a 450 nanometro all'interno di 10 minuetti dopo l'aggiunta della soluzione di arresto.

Riassunto

1. Prepari tutti i reagenti, campioni e norme.

2. Aggiunga bene il campione ed il reagente di ELISA in ciascuno. Incubi per 1 ora a 37°C.

3. Lavi il piatto 5 volte.

4. Aggiunga la soluzione A e B. Incubate del substrato per 10 minuti a 37°C.

5. Aggiunga fermano la soluzione ed il colore si sviluppa.

6. Legga il valore del OD in 10 minuti.

Referances

«l'espressione Fase-specifica della proteina di base della mielina in oligodendrocytes comprende la repressione di Nkx2.2-mediated che è alleviata dal fattore di trascrizione Sp1.»
Wei Q., Miskimins W.K., Miskimins R.
J. Biol. chim. 280:16284- 16294(2005)