96 corredo di ELISA del panino del ratto GFAP di ricerca del laboratorio di pozzi di pozzi 48 2 ore di lunghezza di analisi

96 corredo di ELISA del panino del ratto GFAP di ricerca del laboratorio di pozzi di pozzi 48 2 ore di lunghezza di analisi

Ra di Cat.No E0538

Uso progettato

Questo corredo del panino è per la rilevazione quantitativa accurata della proteina acida fibrillare di Glial del ratto (anche conosciuta come GFAP) in siero, il plasma, i galleggianti della coltura cellulare, i lysates delle cellule, omogeneati del tessuto.

Gamma standard della curva: 10pg/ml - 2000pg/ml

Sensibilità: 5.43pg/ml

il prodotto di *This serve per uso della ricerca soltanto, non nelle procedure di diagnosi. È altamente raccomanda di leggere questa istruzione interamente prima dell'uso.

Reagente fornito

Materiale richiesto ma non assicurato

• Incubatrice 37°C±0.5°C
• Carta assorbente
• Pipette di precisione e punte eliminabili della pipetta
• Pulisca i tubi
• Deionizzato o acqua distillata
• Lettore di Microplate con 450 il filtro da lunghezza d'onda del ± 10nm

Il siero della raccolta di esemplare permette che il siero si coaguli per 10-20 minuti alla temperatura ambiente. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per 20 minuti.

Il plasma raccoglie il plasma facendo uso degli ED o dell'eparina come anticoagulante. Centrifughi i campioni per 15 minuti a 2000-3000 giri/min. a 2 - 8°C in 30 minuti della raccolta.

L'urina si raccoglie dal tubo sterile. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Nel raccogliere il liquido fluido e cerebrospinale pleuroperitoneal, segua prego le procedure suddette.

Il surnatante della coltura cellulare si raccoglie dai tubi sterili quando esaminano secerni le componenti. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Raccolga con attenzione i surnatanti. Nell'esaminare le componenti all'interno della cellula, usi PBS (pH 7.2-7.4) per diluire la sospensione delle cellule alla concentrazione nelle cellule di circa 1 million/ml. Danneggi le cellule durante i cicli di gelo-disgelo ripetuti per terminare le componenti interne. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Tessuti del risciacquo del tessuto in PBS (pH 7,4) per rimuovere completamente sangue in eccesso e da pesare prima di omogeneizzazione. Triti i tessuti ed omogeneizzili in PBS (pH7.4) con un omogeneizzatore di vetro su ghiaccio. Sciolga a 2-8°C o congeli alla centrifuga di -20°C. a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Procedura di analisi

1. Prepari tutti i reagenti, soluzioni tipo e campioni come istruiti. Porti tutti i reagenti alla temperatura ambiente prima dell'uso. L'analisi è eseguita alla temperatura ambiente.

2. Determini il numero delle strisce richieste per l'analisi. Inserisca le strisce nei telai per uso. Le strisce inutilizzate dovrebbero essere immagazzinate a 2-8°C.

3. Aggiunga bene la norma 50μl alla norma. Nota: Non aggiunga bene l'anticorpo alla norma perché la soluzione tipo contiene l'anticorpo biotinylated.

4. Aggiunga il campione 40μl ai pozzi del campione e poi aggiunga l'anticorpo anti--GFAP 10μl ai pozzi del campione, quindi aggiunga lo streptavidin-HRP 50μl ai pozzi del campione ed ai pozzi standard (pozzo di controllo non in bianco). Mescoli bene. Copra il piatto di sigillatore. Incubi 60 minuti a 37°C.

5. Rimuova il sigillatore e lavi il piatto 5 volte con l'amplificatore del lavaggio. Inzuppari i pozzi almeno nell'amplificatore del lavaggio da 0,35 ml per 30 secondi - 1 minuto per ogni lavaggio. Per il lavaggio automatizzato, aspiri tutti i pozzi e lavi 5 volte con l'amplificatore del lavaggio, riempiente troppo scaturisce con l'amplificatore del lavaggio. Macchi il piatto sugli asciugamani di carta o sull'altro materiale assorbente.

6. Aggiunga la soluzione A del substrato 50μl a ciascuno pozzo e poi aggiunga la soluzione B del substrato 50μl a ciascuno bene. Incubi il piatto coperto di nuovo sigillatore per 10 minuti a 37°C nello scuro.

7. Aggiunga 50μl fermano la soluzione a ciascuno bene, il colore blu si trasformerà il giallo immediatamente.

8. Determini la densità ottica (valore del OD) di ciascuno pozzo immediatamente facendo uso di un insieme del lettore del microplate a 450 nanometro all'interno di 10 minuetti dopo l'aggiunta della soluzione di arresto.

Calcolo del risultato

Costruisca una curva standard tracciando il OD medio per ciascuno standard (y) sull'asse verticale contro la concentrazione (x) sull'asse orizzontale e disegni una la migliore curva di misura attraverso i punti sul grafico. Questi calcoli possono essere eseguiti il più bene con il software computerizzato del curva-montaggio e la migliore linea di misura può essere determinata mediante l'analisi di regressione.