Ha personalizzato questo corredo del panino è corredo acido fibrillare di analisi di ELISA della proteina di Glial del ratto della ricerca del laboratorio di alta precisione

Ha personalizzato questo corredo del panino è corredo acido fibrillare di analisi di ELISA della proteina di Glial del ratto della ricerca del laboratorio di alta precisione

Gamma standard della curva: 10pg/ml - 2000pg/ml

Sensibilità: 5.43pg/ml

Dimensione: 96 pozzi

Stoccaggio: Immagazzini i reagenti a 2-8°C. per stoccaggio di 6 mesi eccessivo si riferiscono alla data di scadenza lo tengono ai cicli di disgelo ripetuti Avoid di -20°C. Se i diversi reagenti sono aperti è raccomandato che il corredo sia usato entro 1 mese.

il prodotto di *This serve per uso della ricerca soltanto, non nelle procedure di diagnosi. È altamente raccomanda di leggere questa istruzione interamente prima dell'uso.

Preparato del reagente

Tutti i reagenti dovrebbero essere portati alla temperatura ambiente prima dell'uso.

La norma ricostituisce il 120μl della norma (2400pg/ml) con 120μl di diluente standard per generare una soluzione di azione ordinaria 1200pg/ml. Permetta che la norma si sieda per 15 minuti con agitazione delicata prima della fabbricazione delle diluizioni. Prepari i punti standard duplicati in serie diluendo il 1:2 della soluzione di azione ordinaria (1200pg/ml) con il diluente standard per produrre le soluzioni 600pg/ml, 300pg/ml, 150pg/ml e 75pg/ml. Il diluente standard serve da norma zero (0 pg/ml). Tutta la soluzione restante dovrebbe essere congelata a -20°C ed essere usata entro un mese. La diluizione delle soluzioni tipo suggerite è come segue:

Amplificatore 20ml diluito del lavaggio del concentrato 25x dell'amplificatore del lavaggio nel deionizzato in o acqua distillata per rendere 500 ml di amplificatore del lavaggio 1x. Se i cristalli si sono formati nel concentrato, miscela delicatamente finché i cristalli completamente non si siano dissolti.

Principio di analisi

Questo corredo del test ELISA è un'analisi Enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA). Il piatto è stato ricoperto prima con l'anticorpo del ratto GFAP. GFAP presentano nel campione si aggiungono e legano agli anticorpi ricoperti sui pozzi. E l'anticorpo allora biotinylated del ratto GFAP si aggiunge e lega a GFAP nel campione. Poi Streptavidin-HRP si aggiunge e lega all'anticorpo di Biotinylated GFAP. Dopo incubazione Streptavidin-HRP sciolto è lavato via durante il punto di lavaggio. La soluzione del substrato poi si aggiunge ed il colore si sviluppa proporzionalmente alla quantità di ratto GFAP. La reazione è terminata tramite l'aggiunta di acido ferma la soluzione e la capacità di assorbimento è misurata a 450 nanometro.

Raccolta di esemplare

Il siero permette che il siero si coaguli per 10-20 minuti alla temperatura ambiente. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per 20 minuti.

Il plasma raccoglie il plasma facendo uso degli ED o dell'eparina come anticoagulante. Centrifughi i campioni per 15 minuti a 2000-3000 giri/min. a 2 - 8°C in 30 minuti della raccolta.

L'urina si raccoglie dal tubo sterile. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Nel raccogliere il liquido fluido e cerebrospinale pleuroperitoneal, segua prego le procedure suddette.

Il surnatante della coltura cellulare si raccoglie dai tubi sterili quando esaminano secerni le componenti. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Raccolga con attenzione i surnatanti. Nell'esaminare le componenti all'interno della cellula, usi PBS (pH 7.2-7.4) per diluire la sospensione delle cellule alla concentrazione nelle cellule di circa 1 million/ml. Danneggi le cellule durante i cicli di gelo-disgelo ripetuti per terminare le componenti interne. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Tessuti del risciacquo del tessuto in PBS (pH 7,4) per rimuovere completamente sangue in eccesso e da pesare prima di omogeneizzazione. Triti i tessuti ed omogeneizzili in PBS (pH7.4) con un omogeneizzatore di vetro su ghiaccio. Sciolga a 2-8°C o congeli alla centrifuga di -20°C. a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Noti

• Le concentrazioni del campione dovrebbero essere prevedute prima di essere utilizzato nell'analisi. Se la concentrazione del campione non è all'interno della gamma della curva standard, gli utenti devono contattarci per determinare il campione ottimale per i loro esperimenti particolari.
• I campioni da usare nei 5 giorni dovrebbero essere immagazzinati ai campioni 2-8°C. dovrebbero essere aliquoted o devono essere immagazzinati a -20°C entro 1 mese o a -80°C entro 6 mesi. Avoid ha ripetuto i cicli di gelo-disgelo.
• I campioni dovrebbero essere portati alla temperatura ambiente prima di iniziare l'analisi.
• Centrifuga per raccogliere campione prima dell'uso.
• I campioni che contengono NaN3 non possono essere provati mentre inibisce l'attività della perossidasi (HRP) del rafano.
• Raccolga con attenzione i surnatanti. Quando i sedimenti si sono presentati durante lo stoccaggio, la centrifugazione dovrebbe essere ripetuta.
• L'emolisi può notevolmente urtare la validità dei risultati dei test. Ciao per minimizzare l'emolisi.

il *Sample non può essere diluito con questo corredo. A causa del materiale usiamo per preparare il corredo, l'interferenza di matrice del campione può diminuire erroneamente la specificità e l'accuratezza dell'analisi.

Procedura di analisi

1. Prepari tutti i reagenti, soluzioni tipo e campioni come istruiti. Porti tutti i reagenti alla temperatura ambiente prima dell'uso. L'analisi è eseguita alla temperatura ambiente.

2. Determini il numero delle strisce richieste per l'analisi. Inserisca le strisce nei telai per uso. Le strisce inutilizzate dovrebbero essere immagazzinate a 2-8°C.

3. Aggiunga bene la norma 50μl alla norma. Nota: Non aggiunga bene l'anticorpo alla norma perché la soluzione tipo contiene l'anticorpo biotinylated.

4. Aggiunga il campione 40μl ai pozzi del campione e poi aggiunga l'anticorpo anti--GFAP 10μl ai pozzi del campione, quindi aggiunga lo streptavidin-HRP 50μl ai pozzi del campione ed ai pozzi standard (pozzo di controllo non in bianco). Mescoli bene. Copra il piatto di sigillatore. Incubi 60 minuti a 37°C.

5. Rimuova il sigillatore e lavi il piatto 5 volte con l'amplificatore del lavaggio. Inzuppari i pozzi almeno nell'amplificatore del lavaggio da 0,35 ml per 30 secondi - 1 minuto per ogni lavaggio. Per il lavaggio automatizzato, aspiri tutti i pozzi e lavi 5 volte con l'amplificatore del lavaggio, riempiente troppo scaturisce con l'amplificatore del lavaggio. Macchi il piatto sugli asciugamani di carta o sull'altro materiale assorbente.

6. Aggiunga la soluzione A del substrato 50μl a ciascuno pozzo e poi aggiunga la soluzione B del substrato 50μl a ciascuno bene. Incubi il piatto coperto di nuovo sigillatore per 10 minuti a 37°C nello scuro.

7. Aggiunga 50μl fermano la soluzione a ciascuno bene, il colore blu si trasformerà il giallo immediatamente.

8. Determini la densità ottica (valore del OD) di ciascuno pozzo immediatamente facendo uso di un insieme del lettore del microplate a 450 nanometro all'interno di 10 minuetti dopo l'aggiunta della soluzione di arresto.

Referances

«La perdita di proteina acida fibrillare glial (GFAP) altera la proliferazione di cellula di Schwann e ritarda la rigenerazione del nervo dopo danno.»

Triolo D., Dina G., Lorenzetti I., Malaguti M., Morana P., Del Carro U., Comi G., scompigliante A., Quattrini A., Previtali S.C.

J. Cell. Sci. 119:3981- 3993(2006)