Alto corredo di ELISA della catalasi del ratto di specificità per rilevazione quantitativa accurata

96 corredi di ELISA di pozzi per l'alta specificità del CAT

Cat.No E0869Ra

Gamma standard della curva: 1ng/ml - 300ng/ml

Sensibilità: 0.52ng/ml

Dimensione: 96 pozzi

Stoccaggio: Immagazzini i reagenti a 2-8°C. per stoccaggio di 6 mesi eccessivo si riferiscono alla data di scadenza lo tengono ai cicli di disgelo ripetuti Avoid di -20°C. Se i diversi reagenti sono aperti è raccomandato che il corredo sia usato entro 1 mese.

* questo prodotto serve per uso della ricerca soltanto, non nelle procedure di diagnosi. È altamente raccomanda di leggere questa istruzione interamente prima dell'uso.

Uso progettato

Questo corredo del panino è per la rilevazione quantitativa accurata della catalasi del ratto (anche conosciuta come il CAT) in siero, il plasma, i galleggianti della coltura cellulare, i lysates delle cellule, omogeneati del tessuto.

Principio di analisi

Questo corredo è un'analisi Enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA). Il piatto è stato ricoperto prima con l'anticorpo del CAT del ratto. Il CAT presenta nel campione si aggiunge e lega agli anticorpi ricoperti sui pozzi. E l'anticorpo allora biotinylated del CAT del ratto si aggiunge e lega al CAT nel campione. Poi Streptavidin-HRP si aggiunge e lega all'anticorpo del CAT di Biotinylated. Dopo incubazione Streptavidin-HRP sciolto è lavato via durante il punto di lavaggio. La soluzione del substrato poi si aggiunge ed il colore si sviluppa proporzionalmente alla quantità di CAT del ratto. La reazione è terminata tramite l'aggiunta di acido ferma la soluzione e la capacità di assorbimento è misurata a 450 nanometro.

Raccolta di esemplare

Il siero permette che il siero si coaguli per 10-20 minuti alla temperatura ambiente. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per 20 minuti.

Il plasma raccoglie il plasma facendo uso degli ED o dell'eparina come anticoagulante. Centrifughi i campioni per 15 minuti a 2000-3000 giri/min. a 2 - 8°C in 30 minuti della raccolta.

L'urina si raccoglie dal tubo sterile. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Nel raccogliere il liquido fluido e cerebrospinale pleuroperitoneal, segua prego le procedure suddette.

Il surnatante della coltura cellulare si raccoglie dai tubi sterili quando esaminano secerni le componenti. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Raccolga con attenzione i surnatanti. Nell'esaminare le componenti all'interno della cellula, usi PBS (pH 7.2-7.4) per diluire la sospensione delle cellule alla concentrazione nelle cellule di circa 1 million/ml. Danneggi le cellule durante i cicli di gelo-disgelo ripetuti per terminare le componenti interne. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Tessuti del risciacquo del tessuto in PBS (pH 7,4) per rimuovere completamente sangue in eccesso e da pesare prima di omogeneizzazione. Triti i tessuti ed omogeneizzili in PBS (pH7.4) con un omogeneizzatore di vetro su ghiaccio. Sciolga a 2-8°C o congeli alla centrifuga di -20°C. a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Procedura di analisi

1. Prepari tutti i reagenti, soluzioni tipo e campioni come istruiti. Porti tutti i reagenti alla temperatura ambiente prima dell'uso. L'analisi è eseguita alla temperatura ambiente.

2. Determini il numero delle strisce richieste per l'analisi. Inserisca le strisce nei telai per uso. Le strisce inutilizzate dovrebbero essere immagazzinate a 2-8°C.

3. Aggiunga bene la norma 50μl alla norma. Nota: Non aggiunga bene l'anticorpo alla norma perché la soluzione tipo contiene l'anticorpo biotinylated.

4. Aggiunga il campione 40μl ai pozzi del campione e poi aggiunga l'anticorpo del anti-CAT 10μl ai pozzi del campione, quindi aggiunga lo streptavidin-HRP 50μl ai pozzi del campione ed ai pozzi standard (pozzo di controllo non in bianco). Mescoli bene. Copra il piatto di sigillatore. Incubi 60 minuti a 37°C.

5. Rimuova il sigillatore e lavi il piatto 5 volte con l'amplificatore del lavaggio. Inzuppari i pozzi almeno nell'amplificatore del lavaggio da 0,35 ml per 30 secondi - 1 minuto per ogni lavaggio. Per il lavaggio automatizzato, aspiri tutti i pozzi e lavi 5 volte con l'amplificatore del lavaggio, riempiente troppo scaturisce con l'amplificatore del lavaggio. Macchi il piatto sugli asciugamani di carta o sull'altro materiale assorbente.

6. Aggiunga la soluzione A del substrato 50μl a ciascuno pozzo e poi aggiunga la soluzione B del substrato 50μl a ciascuno bene. Incubi il piatto coperto di nuovo sigillatore per 10 minuti a 37°C nello scuro.

7. Aggiunga 50μl fermano la soluzione a ciascuno bene, il colore blu si trasformerà il giallo immediatamente.

8. Determini la densità ottica (valore del OD) di ciascuno pozzo immediatamente facendo uso di un insieme del lettore del microplate a 450 nanometro all'interno di 10 minuetti dopo l'aggiunta della soluzione di arresto.

Riassunto

1. Prepari tutti i reagenti, campioni e norme.
2. Aggiunga bene il campione ed il reagente di ELISA in ciascuno. Incubi per 1 ora a 37°C.

3. Lavi il piatto 5 volte.

4. Aggiunga la soluzione A e B. Incubate del substrato per 10 minuti a 37°C.

5. Aggiunga fermano la soluzione ed il colore si sviluppa.

6. Legga il valore del OD in 10 minuti.

Riferimenti

Kim C.H., Choi H., Chun Y.S., Kim G.T., parco J.W., Kim M.S.
Pflugers Arch. 442:519- 525(2001)