Gamma standard 0.5ng/ml - 200 ng/ml della curva del buon di specificità del ratto dell'insulina corredo di Elisa

Pozzi obbligatori del tipo di insulina del corredo 96 di ELISA della proteina 1 di fattore di crescita del ratto di specificità e di forte sensibilità

Cat.No E0711Ra

Stoccaggio: Immagazzini i reagenti a 2-8°C. per stoccaggio di 6 mesi eccessivo si riferiscono alla data di scadenza lo tengono ai cicli di disgelo ripetuti Avoid di -20°C. Se i diversi reagenti sono aperti è raccomandato che il corredo sia usato entro 1 mese.

il prodotto di *This serve per uso della ricerca soltanto, non nelle procedure di diagnosi. È altamente raccomanda di leggere questa istruzione interamente prima dell'uso.

Precisione

La precisione di Intra-analisi (precisione all'interno di un'analisi) tre campioni di concentrazione conosciuta è stata provata su un piatto per valutare la precisione di intra-analisi.

La precisione di Inter analisi (precisione fra le analisi) tre campioni di concentrazione conosciuta è stata provata nelle analisi separate per valutare la precisione di inter analisi.

Cv (%) = SD/mean x 100

Intra-analisi: Cv<8>

Inter analisi: Cv<10>

Principio di analisi

Questo corredo è un'analisi Enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA). Il piatto è stato ricoperto prima con l'anticorpo del ratto IGFBP-1. IGFBP-1 presentano nel campione si aggiungono e legano agli anticorpi ricoperti sui pozzi. E l'anticorpo allora biotinylated del ratto IGFBP-1 si aggiunge e lega a IGFBP-1 nel campione. Poi Streptavidin-HRP si aggiunge e lega al Biotinylated IGFBP-1antibody. Dopo incubazione Streptavidin-HRP sciolto è lavato via durante il punto di lavaggio. La soluzione del substrato poi si aggiunge ed il colore si sviluppa proporzionalmente alla quantità di ratto IGFBP-1. La reazione è terminata tramite l'aggiunta di acido ferma la soluzione e la capacità di assorbimento è misurata a 450 nanometro.

Reagente fornito

Materiale richiesto ma non assicurato

• Incubatrice 37°C±0.5°C
• Carta assorbente
• Pipette di precisione e punte eliminabili della pipetta
• Pulisca i tubi
• Deionizzato o acqua distillata
• Lettore di Microplate con 450 il filtro da lunghezza d'onda del ± 10nm

Precauzioni

• Prima di uso, il corredo ed il campione dovrebbero essere riscaldati naturalmente alla temperatura ambiente 30 minuti.
• Questa istruzione deve essere seguita rigorosamente nell'esperimento.
• Una volta che il numero desiderato delle strisce è stato rimosso, immediatamente risigilli la borsa per proteggere il rimanere da deterioramento. Copra tutti i reagenti quando non in uso.
• Make sure che pipetta ordine e tasso di aggiunta da ben-a-bene quando pipettano i reagenti.
• La pipetta fornisce di punta ed il sigillatore del piatto a disposizione dovrebbe essere pulito ed eliminabile evitare la contaminazione trasversale.
• Eviti usando i reagenti dai lotti differenti insieme.
• La soluzione B del substrato è sensibile a luce, non espone la soluzione B del substrato per accendersi a lungo.
• Fermi la soluzione contiene l'acido. Usi prego la protezione dell'occhio, della mano e della pelle quando usando questo materiale. Eviti il contatto di pelle o delle mucose con il reagente del corredo.
• Il corredo non dovrebbe essere usato oltre la data di scadenza.

Raccolta di esemplare

Il siero permette che il siero si coaguli per 10-20 minuti alla temperatura ambiente. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per 20 minuti.

Il plasma raccoglie il plasma facendo uso degli ED o dell'eparina come anticoagulante. Centrifughi i campioni per 15 minuti a 2000-3000 giri/min. a 2 - 8°C in 30 minuti della raccolta.

L'urina si raccoglie dal tubo sterile. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Nel raccogliere il liquido fluido e cerebrospinale pleuroperitoneal, segua prego le procedure suddette.

Il surnatante della coltura cellulare si raccoglie dai tubi sterili quando esaminano secerni le componenti. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Raccolga con attenzione i surnatanti. Nell'esaminare le componenti all'interno della cellula, usi PBS (pH 7.2-7.4) per diluire la sospensione delle cellule alla concentrazione nelle cellule di circa 1 million/ml. Danneggi le cellule durante i cicli di gelo-disgelo ripetuti per terminare le componenti interne. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Tessuti del risciacquo del tessuto in PBS (pH 7,4) per rimuovere completamente sangue in eccesso e da pesare prima di omogeneizzazione. Triti i tessuti ed omogeneizzili in PBS (pH7.4) con un omogeneizzatore di vetro su ghiaccio. Sciolga a 2-8°C o congeli alla centrifuga di -20°C. a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.

Noti

• Le concentrazioni del campione dovrebbero essere prevedute prima di essere utilizzato nell'analisi. Se la concentrazione del campione non è all'interno della gamma della curva standard, gli utenti devono contattarci per determinare il campione ottimale per i loro esperimenti particolari.
• I campioni da usare nei 5 giorni dovrebbero essere immagazzinati ai campioni 2-8°C. dovrebbero essere aliquoted o devono essere immagazzinati a -20°C entro 1 mese o a -80°C entro 6 mesi. Avoid ha ripetuto i cicli di gelo-disgelo.
• I campioni dovrebbero essere portati alla temperatura ambiente prima di iniziare l'analisi.
• Centrifuga per raccogliere campione prima dell'uso.
• I campioni che contengono NaN3 non possono essere provati mentre inibisce l'attività della perossidasi (HRP) del rafano.
• Raccolga con attenzione i surnatanti. Quando i sedimenti si sono presentati durante lo stoccaggio, la centrifugazione dovrebbe essere ripetuta.
• L'emolisi può notevolmente urtare la validità dei risultati dei test. Ciao per minimizzare l'emolisi.

il *Sample non può essere diluito con questo corredo. A causa del materiale usiamo per preparare il corredo, l'interferenza di matrice del campione può diminuire erroneamente la specificità e l'accuratezza dell'analisi.

Procedura di analisi

1. Prepari tutti i reagenti, soluzioni tipo e campioni come istruiti. Porti tutti i reagenti alla temperatura ambiente prima dell'uso. L'analisi è eseguita alla temperatura ambiente.

2. Determini il numero delle strisce richieste per l'analisi. Inserisca le strisce nei telai per uso. Le strisce inutilizzate dovrebbero essere immagazzinate a 2-8°C.

3. Aggiunga bene la norma 50μl alla norma. Nota: Non aggiunga bene l'anticorpo alla norma perché la soluzione tipo contiene l'anticorpo biotinylated.

4. Aggiunga il campione 40μl ai pozzi del campione e poi aggiunga l'anticorpo di 10μl anti-IGFBP-1 ai pozzi del campione, quindi aggiunga lo streptavidin-HRP 50μl ai pozzi del campione ed ai pozzi standard (pozzo di controllo non in bianco). Mescoli bene. Copra il piatto di sigillatore. Incubi 60 minuti a 37°C.

5. Rimuova il sigillatore e lavi il piatto 5 volte con l'amplificatore del lavaggio. Inzuppari i pozzi almeno nell'amplificatore del lavaggio da 0,35 ml per 30 secondi - 1 minuto per ogni lavaggio. Per il lavaggio automatizzato, aspiri tutti i pozzi e lavi 5 volte con l'amplificatore del lavaggio, riempiente troppo scaturisce con l'amplificatore del lavaggio. Macchi il piatto sugli asciugamani di carta o sull'altro materiale assorbente.

6. Aggiunga la soluzione A del substrato 50μl a ciascuno pozzo e poi aggiunga la soluzione B del substrato 50μl a ciascuno bene. Incubi il piatto coperto di nuovo sigillatore per 10 minuti a 37°C nello scuro

7. Aggiunga 50μl fermano la soluzione a ciascuno bene, il colore blu si trasformerà il giallo immediatamente.

8. Determini la densità ottica (valore del OD) di ciascuno pozzo immediatamente facendo uso di un insieme del lettore del microplate a 450 nanometro all'interno di 10 minuetti dopo l'aggiunta della soluzione di arresto.

Calcolo del risultato

Costruisca una curva standard tracciando il OD medio per ciascuno standard (y) sull'asse verticale contro la concentrazione (x) sull'asse orizzontale e disegni una la migliore curva di misura attraverso i punti sul grafico. Questi calcoli possono essere eseguiti il più bene con il software computerizzato del curva-montaggio e la migliore linea di misura può essere determinata mediante l'analisi di regressione.

Referances

«Modulazione dipendente dall'ossigeno della biosintesi obbligatoria del tipo di insulina della proteina di fattore di crescita nelle culture primarie degli epatociti del ratto.»
Scharf J.G., Unterman T.G., Kietzmann T.
Endocrinologia 146:5433- 5443(2005)