Corredo canino di ELISA del progesterone con alto Spesificity e la sensibilità
Cat.No E0057Ca
Gamma standard della curva: 1ng/ml - 100ng/ml
Sensibilità: 0.51ng/ml
Dimensione: 96 pozzi
Stoccaggio: Immagazzini i reagenti a 2-8°C. per stoccaggio di 6 mesi eccessivo si riferiscono alla data di scadenza lo tengono ai cicli di disgelo ripetuti Avoid di -20°C. Se i diversi reagenti sono aperti è raccomandato che il corredo sia usato entro 1 mese.
* questo prodotto serve per uso della ricerca soltanto, non nelle procedure di diagnosi. È altamente raccomanda di leggere questa istruzione interamente prima dell'uso.
Uso progettato
Questo corredo del panino è per la rilevazione quantitativa accurata di progesterone canino (anche conosciuto come PROG) in siero, il plasma, i galleggianti della coltura cellulare, i lysates delle cellule, omogeneati del tessuto.
Raccolta di esemplare
Il siero permette che il siero si coaguli per 10-20 minuti alla temperatura ambiente. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per 20 minuti.
Il plasma raccoglie il plasma facendo uso degli ED o dell'eparina come anticoagulante. Centrifughi i campioni per 15 minuti a 2000-3000 giri/min. a 2 - 8°C in 30 minuti della raccolta.
L'urina si raccoglie dal tubo sterile. Centrifuga a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Nel raccogliere il liquido fluido e cerebrospinale pleuroperitoneal, segua prego le procedure suddette.
Il surnatante della coltura cellulare si raccoglie dai tubi sterili quando esaminano secerni le componenti. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti. Raccolga con attenzione i surnatanti. Nell'esaminare le componenti all'interno della cellula, usi PBS (pH 7.2-7.4) per diluire la sospensione delle cellule alla concentrazione nelle cellule di circa 1 million/ml. Danneggi le cellule durante i cicli di gelo-disgelo ripetuti per terminare le componenti interne. Centrifughi a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.
Tessuti del risciacquo del tessuto in PBS (pH 7,4) per rimuovere completamente sangue in eccesso e da pesare prima di omogeneizzazione. Triti i tessuti ed omogeneizzili in PBS (pH7.4) con un omogeneizzatore di vetro su ghiaccio. Sciolga a 2-8°C o congeli alla centrifuga di -20°C. a 2000-3000 giri/min. per circa 20 minuti.
Preparato del reagente
Tutti i reagenti dovrebbero essere portati alla temperatura ambiente prima dell'uso.
La norma ricostituisce il 120μl della norma (128ng/ml) con 120μl di diluente standard per generare una soluzione di azione ordinaria 64ng/ml. Permetta che la norma si sieda per 15 minuti con agitazione delicata prima della fabbricazione delle diluizioni. Prepari i punti standard duplicati in serie diluendo il 1:2 della soluzione di azione ordinaria (64ng/ml) con il diluente standard per produrre le soluzioni 32ng/ml, 16ng/ml, 8ng/ml e 4ng/ml. Il diluente standard serve da norma zero (0 ng/ml). Tutta la soluzione restante dovrebbe essere congelata a -20℃ ed essere usata entro un mese. La diluizione delle soluzioni tipo suggerite è come segue:
| 64ng/ml |
No.5 standard |
diluente originale di norma 120μl + di norma 120μl |
| 32ng/ml |
No.4 standard |
120μl standard diluente di norma No.5 + 120μl |
| 16ng/ml |
No.3 standard |
120μl standard diluente di norma No.4 + 120μl |
| 8ng/ml |
No.2 standard |
120μl standard diluente di norma No.3 + 120μl |
| 4ng/ml |
No.1 standard |
120μl standard diluente di norma No.2 + 120μl |
| Concentrazione standard |
No.5 standard |
No.4 standard |
No.3 standard |
No.2 standard |
No.1 standard |
| 128ng/ml |
64ng/ml |
32ng/ml |
16ng/ml |
8ng/ml |
4ng/ml |
Amplificatore 20ml diluito del lavaggio del concentrato 30x dell'amplificatore del lavaggio nel deionizzato in o acqua distillata per rendere 500 ml di amplificatore del lavaggio 1x. Se i cristalli si sono formati nel concentrato, miscela delicatamente finché i cristalli completamente non si siano dissolti.
Procedura di analisi
1. Prepari tutti i reagenti, soluzioni tipo e campioni come istruiti. Porti tutti i reagenti alla temperatura ambiente prima dell'uso. L'analisi è eseguita alla temperatura ambiente.
2. Determini il numero delle strisce richieste per l'analisi. Inserisca le strisce nei telai per uso. Le strisce inutilizzate dovrebbero essere immagazzinate a 2-8°C.
3. Aggiunga bene la norma 50μl alla norma. Nota: Non aggiunga bene l'anticorpo alla norma perché la soluzione tipo contiene l'anticorpo biotinylated.
4. Aggiunga il campione 40μl ai pozzi del campione e poi aggiunga l'anticorpo anti--PROG 10μl ai pozzi del campione, quindi aggiunga lo streptavidin-HRP 50μl ai pozzi del campione ed ai pozzi standard (pozzo di controllo non in bianco). Mescoli bene. Copra il piatto di sigillatore. Incubi 60 minuti a 37°C.
5. Rimuova il sigillatore e lavi il piatto 5 volte con l'amplificatore del lavaggio. Inzuppari i pozzi almeno nell'amplificatore del lavaggio da 0,35 ml per 30 secondi - 1 minuto per ogni lavaggio. Per il lavaggio automatizzato, aspiri tutti i pozzi e lavi 5 volte con l'amplificatore del lavaggio, riempiente troppo scaturisce con l'amplificatore del lavaggio. Macchi il piatto sugli asciugamani di carta o sull'altro materiale assorbente.
6. Aggiunga la soluzione A del substrato 50μl a ciascuno pozzo e poi aggiunga la soluzione B del substrato 50μl a ciascuno bene. Incubi il piatto coperto di nuovo sigillatore per 10 minuti a 37°C nello scuro.
7. Aggiunga 50μl fermano la soluzione a ciascuno bene, il colore blu si trasformerà il giallo immediatamente.
8. Determini la densità ottica (valore del OD) di ciascuno pozzo immediatamente facendo uso di un insieme del lettore del microplate a 450 nanometro all'interno di 10 minuetti dopo l'aggiunta della soluzione di arresto.
Riferimenti
[1] «espressione ad alto livello in Escherichia coli dell'ormone della crescita bovina biologicamente attiva. «George H.J., L'Italien J.J., Pilacinski W.P., Glassman D.L., Krzyzek R.A.DNA 4:273- 281(1985)
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